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    原代细胞培养体系配置方法

    发布时间: 2023-03-07  点击次数: 3574次

    原代代培养体系一般由以下四种 (三种) 组成:

     

    名称

    体积

    保存条件

    基础培养基

    500ml

    4℃、避光

    添加剂

    5ml

    -20℃、避

    胎牛血清 (FBS)

    0-50ml

    -20℃、避

    双抗 (青霉素/链霉素,P/S)

    5ml

    -20℃、避

     

    添加剂和双抗通常浓度为 100X(100 倍工作浓度)。血清的添加比例有 0%(不添加),1%(5ml), 2%  (10ml),5%  (25ml),10%  (50ml) 几种。

    一次使用时先将-20℃保存的添加剂、双抗、FBS 转移到 4℃溶解后,在灭菌后的百级洁净 等级环境中操作,所使用的容器和移液耗材均需要进行过无菌处理。

    首先将解冻的 FBS、添加剂和双抗进行分装,平均分装成 5- 10 份,留下本次配制所需要的量, 剩余的继续放回-20℃保存,之后按需取用融化后配制培养基,避免反复冻融。

    建议用无菌的 50ml 离心管盛装配置好的培养基。

     

    配制方法:在每个 50ml 离心管中加入①500ul 添加剂、②500ul 双抗、③50×血清百分比 ml 的胎牛血清、④ (50× (1-血清百分比) - 1) ml 的基础培养基。配制完成后盖上盖子, 颠倒混匀备用。

    例如:在血清比例为 5%的条件下,50ml 离心管中各组分的体积分别为:

    基础培养基:(50× (1-5%) - 1) =46.5ml+添加剂:500ul +双抗:500ul+血清:50×5%=2.5ml

     

    配置好的培养基置于 4℃避光保存。由于添加剂中有很多重组蛋白,易发生降解,故配置好的培养基有效期仅为 3-4 周,请尽快使用。因此建议每次配制 1-2 (50- 100ml),当然 使用量大的情况下也可以适量增加配置量

     

    P.S. :不建议客户将全部的血清、双抗、添加剂直接加入基础培养中混匀使用,原因如下: 1.500ml 的基础培养基的体积较大,灌装时体积波动很大,直接加入,无法准确地控制因子 血清的工作浓度。

    2.     配制好的培养基仅能在 4℃保存 3-4 周,如果期间没用完,继续使用会影响培养效果。 如果是-20℃保存,可以延长保存时间,但是反复冻融也会影响培养基的效果

    3.      如果使用培养基时由于操作失误导致污染,分装能减少培养基的损失量。